分子實驗分子互作：Pull-down下拉實驗

一、技術簡介

Pull-down實驗，又稱拉下實驗，是一種體外親和純化技術。

二、技術原理

將一種蛋白質固定于某種基質上（如Sepharose），但細胞抽提液經過該基質時，可與該固定蛋白相互作用的配體蛋白被吸附，而沒有被吸附的“雜質"則隨洗脫液流出。被吸附的蛋白可以通過改變洗脫液或洗脫條件而回收下來。

三、應用場景

1.驗證已知蛋白相互作用：通過將已知的誘餌蛋白與可能相互作用的獵物蛋白進行Pull-down實驗，若能檢測到獵物蛋白的存在，則可驗證兩者之間的相互作用關系。

2.篩選未知蛋白相互作用：將誘餌蛋白與細胞裂解液或其他蛋白質混合物進行Pull-down實驗，然后對結合的蛋白質進行鑒定，可篩選出與誘餌蛋白相互作用的未知蛋白。

3.研究蛋白質復合物組成：通過Pull-down實驗分離出蛋白質復合物，然后對復合物中的蛋白質進行鑒定，可確定蛋白質復合物的組成成分。

4.研究蛋白質與核酸相互作用：利用DNA Pull-down和RNA Pull-down技術，可研究蛋白質與DNA、RNA之間的相互作用，如轉錄因子與啟動子的結合、RNA結合蛋白與RNA的結合等。

四、技術優勢

可以確定目的蛋白和檢測蛋白是否可以發生直接相互作用。

五、樣本類型

新鮮細胞（貼壁細胞/懸浮細胞）、凍存細胞、凍存組織、裂解液樣本。

六、樣本需求

細胞樣本：約5×10^6個（可以是2個6cm皿，或以懸浮細胞形式存儲于離心管中，或2個T25瓶）；

凍存組織：約40mg；

裂解液樣本：蛋白濃度不低于2mg/mg，蛋白總量不低于3mg。

七、樣本準備&運輸

活細胞樣本：距離較近的可提供新鮮樣本，將培養在皿/T25瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞（最遲次日達）運輸，本市內可閃送或親自遞送，距離較遠的，可-80℃凍存細胞干冰運輸；

組織樣本&裂解液樣本：-80℃凍存干冰運輸。

八、需提供的試劑

如進行WB檢測，需提供相應抗體。

九、實驗周期

3-4周（不包含質譜）

十、其他

RNA-Pull-down、DNA-Pull-down、GST-Pull-down，具體需告知種屬及目標蛋白，后續檢測Western blot/蛋白質譜，融合蛋白體外表達費用需根據具體目標蛋白單獨評估計算。

的轉錄因子，部分實驗亦可使用重組表達的蛋白。

六、樣本需求

細胞樣本：約1×10^7個（可以是1個10cm皿，或以懸浮細胞形式存儲于離心管中，或1個T75瓶）；

凍存組織：約400mg；

植物組織：約2g；細胞核蛋白、純化轉錄因子、重組表達蛋白等：每張膜至少提供50ul，濃度不低于0.5mg/ml。

七、樣本準備&運輸

活細胞樣本：距離較近的可以將養在皿/T75瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞（最遲次日達）運輸，本市內可閃送或親自遞送，距離較遠的，可-80℃凍存細胞干冰運輸；

組織樣本&其他液體樣本：-80℃凍存干冰運輸。

八、需提供的試劑

結合蛋白特異性抗體50ul以上，濃度大于0.5mg/ml。

九、實驗周期

2-3周

十、其他

探針序列，如無探針序列，請提供DNA結合蛋白相關信息或相關文獻。