分子互作實驗IP/CO-IP免疫共沉淀

一、技術簡介

IP（免疫沉淀，Immunoprecipitation）和Co-IP（免疫共沉淀，Co-Immunoprecipitation）是研究蛋白質功能及相互作用的核心技術，廣泛應用于分子生物學和細胞生物學領域。

二、技術原理

IP通過特異性抗體與目標蛋白結合，利用抗體將靶標蛋白（即抗原）分離出來，從而檢測某一種蛋白的表達情況；而CO-IP是在IP基礎上，驗證蛋白質間的相互作用。通過捕獲一個蛋白（誘餌蛋白），檢測與其結合的互作蛋白（靶蛋白），從而特異性富集所研究的目的蛋白，進而研究復合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。

三、應用場景

1.IP：富集低豐度蛋白用于質譜鑒定（IP-MS）、驗證抗體特異性。

2.Co-IP：研究轉錄因子復合物、激酶-底物相互作用及驗證已知互作或發現新互作伙伴（如信號通路復合物）。

四、技術優勢

1.IP：具有高特異性，依賴抗體-抗原的專一性結合。

2.靈活性：支持物可選磁珠（操作簡便、自動化兼容）或瓊脂糖（高結合容量）。

3.Co-IP：體內真實性：研究的是體內自然狀態下的蛋白質互作，可反應比較真實的蛋白互作。

五、樣本類型

新鮮細胞（貼壁細胞/懸浮細胞）、凍存細胞、凍存組織、裂解液樣本。

六、樣本需求

細胞樣本：約5×10^6個（可以是2個6cm皿，或以懸浮細胞形式存儲于離心管中，或2個T25瓶）；

凍存組織：約40mg；裂解液樣本：蛋白濃度不低于2mg/mg，蛋白總量不低于3mg。

七、樣本準備&運輸

活細胞樣本：距離較近的可提供新鮮樣本，將培養在皿/T25瓶/離心管內的新鮮細胞樣本常溫快遞（最遲次日達）運輸，本市內可閃送或親自遞送，距離較遠的，可-80℃凍存細胞干冰運輸；

組織樣本&裂解液樣本：-80℃凍存干冰運輸。

八、需提供的試劑

檢測用IB抗體和IP抗體

九、實驗周期

1-2周（不包含質譜）

十、其他

后續檢測Western blot/蛋白質譜