雙熒光素酶檢測實驗（檢測分子互作）

雙熒光素酶檢測實驗（檢測分子互作）

熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，其中螢火蟲熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase *有代表性。

研究者利用熒光素酶開發(fā)出一套極其靈敏且使用方便 的基因報告系統(tǒng)。目前，雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區(qū)別：1. 物種來源不同；2. 它們的底物和輔因子不同；3. 發(fā)光的顏色不同。

螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白，從甲蟲（Photinus pyralis）中分離得到，大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時存在的條件下，催化底物螢火蟲螢光素氧化，生成氧化螢光素，并發(fā)出黃綠色光，其*發(fā)光波長為560nm。

海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白，從海腎（Renilla reniformis）中分離，大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素，氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide，并發(fā)出藍光，其*發(fā)光波長為465nm。

因此，正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同，所以在雙報告實驗中得到廣泛應用。

雙熒光素酶報告基因檢測優(yōu)勢

單報告基因實驗往往會受到各種實驗條件的影響，而雙報告基因則通過共轉染的“對照"作為內(nèi)參為試驗提供一基準線，從而可以避免細胞活性和轉染效率等外在因素對實驗的影響，使得數(shù)據(jù)結果更為可信。雙熒光素酶報告基因檢測常用的載體有兩種策略。第一種是兩種熒光素分別位于兩個載體上，第二種是兩種熒光素酶位于同一個載體上。

目前，這一系統(tǒng)被廣泛用于轉錄因子結合位點與啟動子活性分析、RNA 降解、信號轉導、藥物篩選、動物活體成像等領域。pGL3-Basic 質粒用于轉錄因子結合位點與啟動子活性分析；psiCHECK2 質粒用于 miRNA 與其靶點相關分析。