RNA pull down實驗技術

RNA pull down實驗技術

1. 實驗原理

RNA pull down是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體，洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過western blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合；或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后，可以純化出與該核酸結合的各種生物大分子復合物。

2. 實驗流程

1）探針設計及標記：體外轉錄或合成獲取RNA，生物素標記;

2）pull down：與細胞裂解液孵育，形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈霉親和素磁珠結合，從而把靶RNA結合蛋白從細胞裂解液中分離出來，經過洗滌將非特異性結合蛋白質去除；最后，洗脫得到與靶RNA結合的蛋白質復合物；

3）互作蛋白質鑒定：再經過Western Blot（WB）或質譜(MS)鑒定蛋白質。

3. 服務內容

1）體外轉錄或合成RNA，生物素標記；

2）細胞培養與細胞裂解液制備；

3）pull down捕獲互作蛋白；

4）Western blot驗證互作蛋白；

5）MS篩選鑒定互作蛋白。

4. 交付結果

1）提供詳細、完整的實驗報告；

2）客觀公正的原始數據和實驗分析結果。

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