原代細(xì)胞分離培養(yǎng)

一、原代細(xì)胞分離培養(yǎng)介紹

原代細(xì)胞(primary cell)是指從生物體獲取細(xì)胞直接培養(yǎng)。常用的原代細(xì)胞分離培養(yǎng)方法有組織塊培養(yǎng)和分散組織培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)：是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)。

組織塊培養(yǎng)法是常用的、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。將組織塊剪切成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，組織小塊貼壁24h或更長(zhǎng)時(shí)間后，細(xì)胞就從組織四周游出。但由于在反復(fù)剪切和接種過(guò)程中對(duì)組織塊的損傷，并不是每個(gè)小塊都能長(zhǎng)出細(xì)胞。用于組織塊培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶可根據(jù)不同細(xì)胞生長(zhǎng)的需要作適當(dāng)處理，如：預(yù)先涂以鼠尾膠原薄層，以利于上皮樣細(xì)胞等的生長(zhǎng)。

分散組織培養(yǎng)：是將組織塊從機(jī)體中取出離散成單個(gè)細(xì)胞，置于合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。分散組織培養(yǎng)也是常用的一種原代細(xì)胞培養(yǎng)方法，通常用機(jī)械法或化學(xué)法將組織塊分散為單細(xì)胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細(xì)胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細(xì)胞間的結(jié)合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細(xì)胞互相粘著所依賴(lài)的Ca2+，再經(jīng)機(jī)械輕度振蕩，使之成為單細(xì)胞。

二、注意事項(xiàng)

1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時(shí)培養(yǎng)，可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應(yīng)切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時(shí)間不能超過(guò)24h。

2. 從消化道、周?chē)袎乃澜M織等污染因素存在的區(qū)域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達(dá)克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。

3. 組織塊不易貼壁，可預(yù)先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養(yǎng)的1～2d內(nèi)要特別注意觀察是否有細(xì)菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現(xiàn)，要及時(shí)清除。

原代細(xì)胞在細(xì)胞學(xué)研究、遺傳學(xué)研究、腫瘤研究、藥物篩選、細(xì)胞移植、類(lèi)器官培養(yǎng)等眾多研究領(lǐng)域備受歡迎，且原代細(xì)胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用市場(chǎng)前景廣闊。

三、細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)

• 2D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察
• 3D細(xì)胞培養(yǎng)和觀察
• 原代細(xì)胞分離/培養(yǎng)/鑒定
  
• 細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)（MTT 法/CCK8 法）
• 細(xì)胞凋亡檢測(cè)（AnnexinV FITC/PI雙染流式法/Tunel法）
• 細(xì)胞周期檢測(cè)（PI染料標(biāo)記流式法）
• 細(xì)胞遷移/侵襲檢測(cè)（劃痕法/Transwell法）
• 流式細(xì)胞分選（流式細(xì)胞術(shù)）
• 細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)
• 小管形成實(shí)驗(yàn)（tube formation，體外血管生成實(shí)驗(yàn)）

• 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)

• 細(xì)胞外泌體分離與鑒定
• 慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
• 電生理檢測(cè)
• 個(gè)性化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（藥物篩選等）
  細(xì)胞模型已經(jīng)于人類(lèi)疾病研究和治療藥物的篩選領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。我司可根據(jù)客戶(hù)的具體方案提供多種細(xì)胞模型的構(gòu)建及相應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)功能檢測(cè)。

四、細(xì)胞系產(chǎn)品(展示部分）詳詢(xún)業(yè)務(wù)員！！！

五、公司簡(jiǎn)介  

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專(zhuān)注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè)，坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類(lèi)齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新，科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)"的理念，我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌，以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè)，勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國(guó)各省市自治區(qū)，與國(guó)內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系，贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可，我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)！細(xì)胞系(帶STR鑒定) | 原代細(xì)胞 | 細(xì)胞培養(yǎng)基 | 血清 | 細(xì)胞培養(yǎng)添加因子 | 標(biāo)記細(xì)胞 | 耐藥細(xì)胞 | 生化檢測(cè)試劑盒 | WB試劑 | 抗體 等；ATAC-seq分析 | ChIP-seq分析 | 16S rRNA測(cè)序分析 | Pull down實(shí)驗(yàn) | RIP 實(shí)驗(yàn) | ChIP實(shí)驗(yàn) | Co-IP實(shí)驗(yàn) | 質(zhì)譜檢測(cè) | WB檢測(cè) | PCR檢測(cè) | 細(xì)胞培養(yǎng)/增殖/凋亡/周期/遷移/侵襲/自噬 | 活體成像 | 免疫組化 | 電鏡檢測(cè) | micro-CT 檢測(cè)  等。更多信息，歡迎垂詢(xún)上海昆盟生物科技有限公司。