細胞凋亡檢測：多法探秘生命“謝幕”

　　在生命科學的微觀世界里，細胞凋亡檢測對剖析疾病機理、研發(fā)藥物至關重要。諸多檢測方法各展其長，共同揭開凋亡神秘面紗。

　　形態(tài)學觀察是基礎“視窗”。光學顯微鏡下，經(jīng)特定染色（如吉姆薩染色），凋亡細胞體積縮小、核質濃縮，與周圍正常細胞形成鮮明對比；熒光顯微鏡利用霍echst等染料，讓凋亡細胞核亮起藍白熒光，呈致密塊狀或碎片狀，直觀呈現(xiàn)細胞形態(tài)異變，為初步判斷提供依據(jù)。電子顯微鏡則更進一步，超高倍放大下，清晰可見凋亡細胞膜出芽、氣泡狀結構，線粒體腫脹皺縮，從細微處洞察凋亡特征。

　　生化檢測聚焦關鍵“分子信標”。DNA瓊脂糖凝膠電泳是經(jīng)典手段，凋亡細胞內(nèi)核酸內(nèi)切酶激活，切割DNA形成180-200bp整數(shù)倍寡核苷酸片段，電泳后呈梯狀條帶，如同分子梯田，確鑿指示凋亡發(fā)生。TUNEL法借助末端脫氧核苷酸轉移酶，標記凋亡細胞斷裂DNA的3'-OH末端，顯色或熒光示蹤，高靈敏揪出凋亡“痕跡”，哪怕早期凋亡也無所遁形。
 

　　流式細胞術堪稱“高效安檢儀”。用AnnexinV-FITC/PI雙染試劑，AnnexinV可特異性結合凋亡細胞外翻的磷脂酰絲氨酸，F(xiàn)ITC熒光標記使其在流式圖中顯綠色，PI則進入壞死細胞染色質紅，依據(jù)雙色信號，精準區(qū)分活細胞、早期凋亡、晚期凋亡與壞死細胞，快速定量分析，每小時能處理數(shù)千個細胞，為大規(guī)模樣本研究“提速”。

　　此外，Caspase活性檢測直擊凋亡“執(zhí)行蛋白”。通過比色法、熒光法測定Caspase家族成員活性，因凋亡時這些關鍵酶被激活，催化底物顯色或發(fā)熒光，反映凋亡進程程度。

　　從形態(tài)甄別到分子追蹤、蛋白活性洞察，細胞凋亡檢測方法多元互補，科研者“多管齊下”，方能精準洞悉細胞凋亡奧秘，推動生命科學邁向新程。